Den histotekniska processen Bild från Helander KG. Från patient till mikroskop. FoU rapport 24. Lund: Studentlitteratur, 1987 Morfologisk cellbiologi, 6 hp, vt 2014 Biomedicinska analytikerprogrammet, inriktning laboratoriemedicin Cecilia Ottosson Kapitel 1-5 i Cellular Pathology

Den histotekniska processen Mål: framställa preparat för mikroskopisk undersökning    Prov: biopsier, px kirurgisk utskärning obduktioner PAD - patologisk-anatomisk diagnostik Krav: god morfologi hög specificitet snabbhet

Fixering Förhindra autolys Förhindra bakteriell påverkan Stabilisera vävnaden – skall inte ändra storlek eller form Vävnaden skall kunna färgas Vävnaden skall vara så likt det levande stadiet som möjligt Vara ofarlig, lätthanterlig, prisvärd

Fixering Fysikalisk fixering Kemisk fixering Tid Immersionsfixering Perfusionsfixering

Fixering Formaldehyd - rutin

Fixering Formaldehyd - R - CH2 – R -

Fixering - elektronmikroskopi Glutaraldehyd - ej till – enzymhistokemi immunohistokemi vissa specialfärgningar

Fixering Kvicksilverklorid Osmiumtetroxid Ättiksyra Alkoholer

Fixering Sammansatta fixeringsmedel - ex Zenkers fixeringsmedel - kvicksilverklorid (fixerar cytoplasman krymper vävnaden) - ättiksyra (orsakar svällning) - kaliumdikromat (oxidationsmedel – fixerar fetter)

Fixering - pH Faktorer som påverkar fixeringen - temperatur - volym - vävnadens storlek och täthet (densitet)  

Utskärning Makroskopisk bedömning Utskärning Radikalitet - restriktionssnitt

Dehydrering och klarning

Inbäddning Paraffin Orientering Bilder från Prophet E. Laboratory Methods in Histotechnology. Washington: American Registry of Pathology, 1992

Snittning Mikrotomer Knivar Vinkel 3–5 m

Snittning Problem vid snittning Bilder från Prophet E. Laboratory Methods in Histotechnology. Washington: American Registry of Pathology, 1992

Färgning Avparaffinering och rehydrering Kärnfärgning Kontrastfärgning Dehydrering och montering Översiktsfärgning Specialfärgning

Artefakter Fixeringsartefakter Förlust av material Tillförsel av material Mekaniska artefakter

Urkalkning Hydroxyapatit Syror Kelatbildare Faktorer som påverkar När är urkalkningen färdig?

Plastinbäddning Hårt material Tunna snitt Elektronmikroskopi Akrylplaster Epoxyplaster

Fryssnittning Snabba svar (15-30 min) Material som förstörs Is –inbäddningsmedel Snabb nedfrysning Kryostat (ca -20°C) Fixering efter snittning vid snabba svar!

Storsnittning ”Stora” preparat