Specialfärgningar Cecilia Ottosson Laboratoriemetodik, grundläggande vt14 Biomedicinska analytikerprogrammet, inr laboratoriemedicin

Litteratur Cellular pathology - kap 7, 8, 9 och 14 - repetition kap 6

Specialfärgningar - synligt i mikroskopet Komplement till H&E - påvisa närvaro/frånvaro av en viss typ av molekyler - var på vävnaden är de lokaliserade? - färgningar/histokemiska färgningar Histokemi (vävnadskemi) - lokalisering av olika ämnen i cellerna - synligt i mikroskopet - olöslig produkt - känsliga metoder - detektion på plats

Kontroller - test av metoden Positiv kontroll Negativ kontroll - bakgrund - så likt det som ska studeras - simultant med provet Negativ kontroll

Färgning av bindväv Kollagen och muskel -Trikromfärgning Retikelfibrer regel: en mindre molekyl kommer att penetrera och färga in vävnaden, men när en större molekyl kan penetrera samma vävnad kommer den att ersätta den mindre molekylen Retikelfibrer - Silverimpregnering - Argyrofil reaktion

Masson trikrom Avparaffinering och rehydrering Järnhematoxylin Ponceau-Syrefuchsinlösning Phosphomolybdic/ phosphotungstic syra 5. Anilinblå/Light green 6. Dehydrering och montering Kärnor svarta Muskel, röda blodkroppar röda Kollagen blå/grön

Van Gieson Avparaffinering och rehydrering Weigerts hematoxylin Van Gieson (pikrinsyra och syrefuchsin) Dehydrering och montering Kärnor svarta Muskel, röda blodkroppar gula Kollagen röd

Gordon and Sweets Avparaffinering och rehydrering Syrahaltig kaliumpermanganat Oxalsyra Järnalun Silverlösning Formaldehyd Guldklorid Natriumtiosulfat Dehydrering och montering Retikelfibrer svart

Färgning av kolhydrater Påvisandet av polysackarider - ex glykogen

Färgning av kolhydrater PAS (Periodic Acid Schiff) - perjodsyra – klyvning av kol-kol bindningen  aldehyder - Schiffs reagens

PAS Avparaffinering och rehydrering Perjodsyra Schiffs reagens Harris hematoxylin Dehydrering och montering PAS-positiv material magenta Kärnor blålila

Färgning av kolhydrater AB (Alcian Blue) - sura mukoplysackarider - katjon färg → binder till negativt laddade grupper - differentiering: pH 1 el pH 2,5 AB-PAS (PAS-AB) - differentiering mellan neutrala och sura mukopolysackarider - sura mukopolysackarider – AB- färgning - neutrala mukopolysackarider – PAS-färgning - AB före PAS PAS-Diastas - differentiering mellan glykogen och andra mukosubstanser - diastas (α-amylas) bryter ner glykogenet till glukos

AB Avparaffinering och rehydrering Alcian blå-lösning med önskat pH Neutral rött Dehydrering och montering Sura muciner blåa Kärnor röda

AB-PAS Avparaffinering och rehydrering Alcian blå Perjodsyra Schiffs reagens Harris hematoxylin Dehydrering och montering Sura muciner blåa Neutrala muciner röda Blandning lila Kärnor blålila

PAS-Diastas Avparaffinering och rehydrering Ett snitt i diastaslösning, ett snitt i avjoniserat vatten Perjodsyra Schiffs reagens Harris hematoxylin Dehydrering och montering Glykogen magenta i det obehandlade snittet, saknas i det behandlade snittet Kärnor blålila

Färgning av fettceller Fryssnittning Lysokrom-metod - hydrofoba färger – löslig i fettcellerna Neutrala lipider – flytande/halvfast form vid RT Kolesterol – kristalliserad vid RT  färgning vid smältpunkten (150° C) Fosfolipider – fosfatgrupp, görs mer hydrofila, ej med lysokrommetoder

Oil Red O Neutrala lipider Hydrofobisk färg Oil Red O Harris Hematoxylin Montering med vattenbaserad monteringsmedel Fettceller röda Kärnor blålila

Sudan Black Kolesterol och fosfolipider basisk färg Bromlösning Natrium metabisulfit 70 % Etanol Sudan Black Carmalum Montering med vattenbaserad monteringsmedel Neutrala lipider, fosfolipider och kolesterol blå-svarta Kärnor röda

Färgning av enzymer Fryssnitt/utstryk Enzymer - hydrolaser - oxireduktaser Substrat  primär reaktionsprodukt (PRP) PRP + kemiskt ämne  slutlig reaktionsprodukt (SRP) SRP – olöslig (precipitat)

Färgning av enzymer - Gomoris sura fosfataser Hydrolaser – fosfataser - Metallprecipitering - substrat: natrium -glycerolfosfat - PRP: natriumfosfat - SRP: natriumfosfat + bly eller kalcium visualisering med vätesulfid – svart fällning Oxireduktaser - peroxidaser - substrat: H2O2 - PRP: O2 - SRP: O2 + kromogen (ex DAB) färgomslag (brun om DAB)

Färgning av pigmenter Artefaktspigmenter Exogena pigmenter Endogena pigmenter

Perls reaktion Hemosiderrin (järn) Avparaffinering och rehydrering HCl/Kaliumferrocyanid Neutral Red Dehydrering och montering Hemosiderrin blå Kärnor röda

Masson-Fontana Melanin, argentaffina granula Argentaffin reaktion Avparaffinering och rehydrering Silverlösning Natriumtiosulfat Neutral Red Dehydrering och montering Melanin svart Kärnor röda

Färgning av mikroorganismer Formaldehydfixerad material Bakterier Svamp Virus Parasiter

Gramfärgning Bakterier Cellväggens tjocklek Avparaffinering och rehydrering Kristallviolett Jodlösning Aceton Neutral Red Dehydrering och montering Grampositiva blåa Gramnegativa röda

Ziehl-Neelsen Syra-fasta organismer (tuberkulosbakterien) Fettrik cellvägg Avparaffinering och rehydrering Karbolfuchsin HCl-alkohol Metylenblått Dehydrering och montering Syra-fasta organismer röda Bakgrund blå

Grocott Svamp Argentaffin reaktion Avparaffinering och rehydrering Kromsyra Natriumbisulfit Metenamin silverlösning Guldklorid Natriumtiosulfat Light green Dehydrering och montering Svamp svart Bakgrund grön

S-Giemsa Helicobacter pylori Romanowsky Avparaffinering och rehydrering S-Giemsa Dehydrering och montering Helicobacter pylori blåa

Färgning av Amyloid Onormal protein Många former - olika metoder - jod/svavelsyra - metylviolett - Kongo rött

Kongo rött Avparaffinering och rehydrering Harris hematoxylin Dehydrering och montering Amyloid rosa-rött i polarisationsmikroskop äppel grön Kärnor blålila