Molekylspektra De olika färgerna representerar olika koncentrationer

Analys av blod

Analyser som kan utförat på kemiska laboratoriet i Huddinge http://provtagningsanvisningar.karolinska.se/templates/Provanvisningsindex.aspx?id=57402#provanvisningsindexstart

Spectroskopi Molekylspektroskopi uv/vis Absorptionsspektrometri infraröd (filterfotometri, spektrofotometri) Nefelometri (turbidimetri) Emissionsspektrometri fluorescens (fotoluminescens) (fosforescens)

Spektroskopi 2. Atomspektrometri Atomabsorption Atomemission Röntgenfluorescens 3 NMR-spektroskopi (kärn-magnetisk resonans)

Atom elektronskal elektronorbital 3p 3s kärna

Atomspektrum Absorption Emission Natrium-atom Natrium-atom våglängd

Na-spektrum Energinivåer i elektronhöljet

Na-spektrum

Ljusabsorption i atom Exitation Relaxation (de-exitation) E1 E1 Exiterad nivå Exiterad nivå Ef = hc/l DE = Ef DE = Ef Grundnivå E0 Grundnivå E0 Strålningslös övergång

Användningsområden för atomspektroskopi Identifikation av metalljoner (Na, K, Cu , Hg,…, Koncentrationsbestämningar av metalljoner i kroppsvätskor Alternativ metod är jon-selektiv elektrod (jmf pH-elektrod)

Användningsområden av molekylspektroskopi(UV/VIS) Koncentrationsbestämningar av alla lösningar som absorberar ljus i UV eller Visuella området, tex. Hb-bestämning , kan även användas för gaser Kinetiska studier

Molekyl Elektronövergång (n – s*) storlek 2 - 6 eV Vibration Rotation C:a 0,001 eV

Absorption i molekyl Transmittans Absorbans (= -log T) 1 10% Våglängd 560 560

Ljusabsorption i molekyl Exitation Relaxation (de-exitation) E1 Strålningslös övergång Ef = hc/l DE = Ef DE = Ef Grundnivå Grundnivå E0

Absorptionsspektroskopi Transmittans Filter Vitt ljus 100% 35% Prov Transmittans 35% 100% 100% våglängd Vatten 35%

Absorptionsspektroskopi Transmittans = I/I0 Prov I0 I 100% 35% 100% 35% våglängd Absorbans Prov I0 I I = I0* 10-A A = -log T

Absorptionsspektroskopi Absorbans Prov I0 I våglängd I = I0* 10-A Absorbans A = a . b . c Prov I0 I a c a = ämneskonstant c = koncentration c b

Principen för en fotometer

Absorptionsspektroskopi Absorbans Prov I0 I a 1 c1 0,5 c1 c2 a c2 c c2 = 8mg/ml

Kromoforer (ex) Aromatiska ringar (Benzen) proteiner Phe, Tyr, Trp,His (280nm) Nukleotider C,G,A,T (260nm) DNA, RNA Dubbel och trippel-bindningar

Användningsområden av molekylspektroskopi (infraröd) Bygger på ”ljusabsorption” i vibrationsnivåer Identifikation av molekyler Kontroll av renhet Bestämmning av molekylstruktur

Absorption inom infraröda området DE = Ef DE = Ef Exitation Ef = hc/l Relaxation Strålningslös övergång Grundnivå Grundnivå E0

Molekylens vibrations- och rotationsnivåer acetophenone Vibration 0,1 –0,01 eV Rotation C:a 0,001 eV

Användningsområden flourescens Bestämning av låga koncentrationer Bestämning av molekylers massa Immunologiska bestämningar

Emissionspektroskopi Transmittanas Prov 130 Prov våglängd Fluorescens Prov 130

Emissionspektroskopi Prov Transmittans INGEN FLUORESCENS Prov våglängd

Ljusemission i molekyl Exitation Relaxation (de-exitation) Strålnings- lös övergång E1 Ef = hc/l DE = Ef DE = Ef Grundnivå Grundnivå E0

Flouroforer Aromatiska ringar T. ex. Aminosyror: Tyr, 275nm – 303nm Trp 280nm – 348 nm

Fluorokromer Fluorescein 495 519 389 FITC; pH sensitive FluorX 494 520   587 (AP Biotech) BODIPY-FL 503 512   TRITC 547 572 444 X-Rhodamine 570 576 548 XRITC Acridine Orange 503 530/640   DNA/RNA Ethidium Bromide 493 620  394