Separationsmetoder.

En presentation över ämnet: "Separationsmetoder."— Presentationens avskrift:

1 Separationsmetoder

2 Separationsmetoder Kromatografi, gas (GC) eller vätska (LC)
Elektrofores Masspektrometri

3 Kromatografi Gaskromatografi, GC
Separation av t.ex. alkoholer, fetter, … Vätskekromatografi, LC (t.ex HPLC) Separation av vattenlösliga ämnen som ej tål höga temperaturer t.ex. proteiner, DNA, …

4 Kromatografi Provet passerar en kolonn som separerar partiklarna med avseende på storlek eller kemiska egenskaper beroende på kolonn- materialets egenskaper

5 Separationen sker genom att en rörlig fas med de lösta ämnena rör sig genom en fast fas (stationär fas). Den rörliga fasen kan vara i vätske- eller gasform. Den stationära fasen kan vara i fast eller vätskeform (gel)

6 Gaskromatograf

7 FID detektor

8 HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

9 Diod-Array detektor

10 Affinitetskromatografi

11 Elektrofores Separation av t.ex. proteiner eller DNA fragment efter storlek och ladding. Bestämning av DNA sekvens, sekvensering

12 Elektrofores Joner separeras i en gel genom att de utsätts för ett elektriskt fält. Jonerna kan separeras på grund av sin laddning och storlek.

13 Sekvensering

14 Elektrofores

15 Kapillär-elektrofores

16

17 Mass- spektrometri (MS)
Bestämma massan på molekyler och atomer Framställa fragment i gasform av provet Mäta massan på fragmenten. Fragmenten ger ett fingeravtryck av provet Studera relativa andelen av olika fragmentens massor. Studera relativa andelen av olika isotoper.

18 Historiskt perspektiv
J.J Thompson : Upptäckte att Neon hade flera isotoper c:a Fragmentering av molekyler. Dempster : konstruerade första ms med riktningsfokusering c.a 1920, elektron källa. Användes t.ex vid anrikning av U-235 för första Atombomben.

19 Principen för en enkel Mass Spektrometer (MS)
massan = m r laddningen = q r är unik för ett värde på kvoten m/q

20 Mass spektrum av benzyl alkohol

21 Joniseringsmetod Electron Impact Ionization

22 Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI)
Joniseringsmetoder Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI)

23 Analysmetoder (MALDI) ToF

24 Mass-spektrum

25 Analysmetoder Quadropole mass filter
-(U+Vcos(wt)) +(U +Vcos(wt))

26 Joniseringmetoder Electronspray (ESI)
1 – 5kV spänning då areosolen lämnar kapillären. ”dropparna” torkar in (”hyperladdning”) Coulombic explosion Jonerna i gasfas

27 GCMS homepage.univie.ac.at/Wolfgang.Werther/Folie1.JPG

28 Historiskt perspektiv
GC-MS mitten på 50-talet. Test av läkemedel, hormoner, föroreningar,… MALDI (1985), ES-MS (1988) m.fl. har gett möjlighet att studera stora biomolekyler. (Nobelpris 2002) Kan användas vid diagnos av t.ex Malaria och Cancer (äggstock-, prostata-, bröst-)

29 Jonisationsmetoder Jonisations metod Typisk molekyl Prov preparation
Mass range Egenskaper EI Liten flyktig GC/vätske eller fast prob -1000 Da Hård ger struktur info CI Da Mjuk ESI Peptid/protein LC/spruta Da Mjuk / multi-laddad FAB Kolhydrater Prov +Matrix Da Hårdare än ESI MALDI Da mjuk