Mikroskopi
Varför mikroskop? m Celler och cellstruktur Mikro- organism 10-3 1mm Storlek av vissa celler och cellstrukturer samt mikroskopets användbarhet. Varför mikroskop? m Celler och cellstruktur Mikro- organism 10-3 1mm 10-4 Äggcell (0,15-0,2) Protozoer 10-5 Ljusmikroskop 10-6 Mitokondrier Bakterier 10-7 Elektronmikroskop 10-8 Ribosomer Plasmamembran virus 10-9 1nm Ribonukleo protein 10-10 Aminossyra väteatom
Olika linstyper Konvexa linser Konkava linser Samlar strålar mot fokus, brännpunkt kan ge en reell bild kan användas som lupp, virtuell bild används som läsglas Konkava linser sprider ljusstrålarna ger en virtuell bild används för närsynthet
Interactive Java Tutorials Princip för Interactive Java Tutorials Microscope Optical Train Java Tutorials Microscope Conjugate Field Planes http://www.microscopyu.com/tutorials/java/kohler/index.html
Bildkonstruktion
Skarp bild: För varje punkt i föremålet finns en motsvarande punkt i bilden. Reella bilder kan fångas på en skärm, kan fås av konvex lins, jmf fotografi. Virtuella bilder, som ej kan fångas upp av skärm, fås av luppen, glasögon, jmf spegelbild.
Olika kvalitets begrepp hos en bild Upplösning: Mått på hur litet ett avstånd mellan två punktformiga föremål kan vara, utan att dess bild flyter ihop. Litet avstånd för hög upplösning. Kontrast: Hur tydligt ett objekt framstår mot bakgrunden. Skärpedjup: Mått på hur bra föremål, som är separerade i djupled, kan avbildas skarp samtidigt. Hög förstoring ger litet skärpedjup
Preparering för mikroskopering Principle & use of the Leica SP1600 saw microtome Application Report (Page 2 of 5) Preparat för ljusmikroslop c:a 6 – 8 mm Infärgas med färg som binder till olika strukturer med olika affinitet Preparat för TEM c:a 40 – 80 nm Infärgas med ämnen som innehåller tungmetaller t.ex uran (uranylacetat) eller bly (blycitrat)
Mikroskop tekniker Ljusmikroskop Ljusfälts-mikroskop Mörkfälts-mikroskop Faskontrast-mikroskop Fluorescens-mikroskop Confokal-mikroskop Polarisations-mikroskop Elektronmikroskop SEM (Scanning Electron Microscope) TEM (Transmission Electron Microscope)
Ljusfältsmikroskop Infärgning för att få ökad kontrast Skin section stained with haematoxylin and eosin showing sebaceous glands and hair follicles
Ljusfältsmikroskop Ljusabsorption
Ljusfältsmikroskop
Mörkfältsmikroskop Ljusreflexion Ingen infärgning behövs
Mörkfältsmikroskop Live and dry blood darkfield microscopy analysis Brina Eidelson ANP, MLDUK
Faskontrastmikroskop Ljuset ur fas
Faskontrastmikroskop preparat 0:te ordningen 1:a ordningen Ljuset en kvarts våglängd ur fas fasplatta Ljuset halv våglängd ur fas
Faskontrastmikroskop The urine contains epithelial cells, red and white blood cells and baccilli shaped bacteria. Grando, Danilla
Faskontrastmikroskop
Luciferin-luciferas komplex En ljusbringande substan och ett bakterie bakteriellt enzym (NADH konc. 0,1 nM – 1pM)
Eldfluga – Luceferas system ATP konc ner till 0,001pM
Energidiagram
Fluorescensmikroskop Exitation Emission Acredine Orange 440 480 520 650
Fluorescensmikroskopi objektiv UV-lampa
Fluorescensmikroskop
Konfokalmikroskop
Bildkonstruktion i konfokalmikroskop
Polarisationsmikroskopi 1 2 Dubbelbrytande amyloidfiber 1 2
Polarisationsmikroskop objekt polarisationsfilter
Pankreas Goligi 200 nm
SEM mitokondrie (200000X) Guldplatinerat Biol.Inst. Shizuoka Univ.
SEM acept.asu.edu/PiN/rdg/elmicr/elmicr.shtml
Elektronmikroskop (TEM)
Upplösning för olika tekniker TECHNIQUE LIMITS RESOLUTION eye ”praktiskt” retina 200000 nm 70nm optical microscope diffraction of light 300nm scanning electron microscope diffraction of electrons 3 nm transmission electron microscope 0,1 nm near-field scanning probe microscopies "aperture" size 0.01 - 10 nm 1 nm = 10 –6 mm
Repetition: mikroskoptyper som bygger på ljusinteraktion
Repetition elektronmikroskop provet ”belyses” med ljus TEM : Transmission Electron Microscope Bygger på att elektroner bestrålning där en del av electronerna absorberas i materialet SEM: Scanning Electron Microscope Bygger på spridning av electroner mot en plattinerad yta
SEM Damm tuss 800x
SEM