Separationsmetoder

Separationsmetoder Kromatografi, gas (GC) eller vätska (LC) Elektrofores Masspektrometri

Kromatografi Gaskromatografi, GC Separation av t.ex. alkoholer, fetter, … Vätskekromatografi, LC (t.ex HPLC) Separation av vattenlösliga ämnen som ej tål höga temperaturer t.ex. proteiner, DNA, …

Kromatografi Provet passerar en kolonn som separerar partiklarna med avseende på storlek eller kemiska egenskaper beroende på kolonn- materialets egenskaper

Separationen sker genom att en rörlig fas med de lösta ämnena rör sig genom en fast fas (stationär fas). Den rörliga fasen kan vara i vätske- eller gasform. Den stationära fasen kan vara i fast eller vätskeform (gel)

Gaskromatograf

FID detektor

HPLC (High Performance Liquid Chromatography)

Diod-Array detektor

Affinitetskromatografi

Elektrofores Separation av t.ex. proteiner eller DNA fragment efter storlek och ladding. Bestämning av DNA sekvens, sekvensering

Elektrofores Joner separeras i en gel genom att de utsätts för ett elektriskt fält. Jonerna kan separeras på grund av sin laddning och storlek.

Sekvensering

Elektrofores

Kapillär-elektrofores

Mass- spektrometri (MS) Bestämma massan på molekyler och atomer Framställa fragment i gasform av provet Mäta massan på fragmenten. Fragmenten ger ett fingeravtryck av provet Studera relativa andelen av olika fragmentens massor. Studera relativa andelen av olika isotoper.

Historiskt perspektiv J.J Thompson : Upptäckte att Neon hade flera isotoper c:a 1900. Fragmentering av molekyler. Dempster : konstruerade första ms med riktningsfokusering c.a 1920, elektron källa. Användes t.ex vid anrikning av U-235 för första Atombomben.

Principen för en enkel Mass Spektrometer (MS) massan = m r laddningen = q r är unik för ett värde på kvoten m/q

Mass spektrum av benzyl alkohol

Joniseringsmetod Electron Impact Ionization

Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI) Joniseringsmetoder Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI)

Analysmetoder (MALDI) ToF

Mass-spektrum

Analysmetoder Quadropole mass filter -(U+Vcos(wt)) +(U +Vcos(wt))

Joniseringmetoder Electronspray (ESI) 1 – 5kV spänning då areosolen lämnar kapillären. ”dropparna” torkar in (”hyperladdning”) Coulombic explosion Jonerna i gasfas

GCMS homepage.univie.ac.at/Wolfgang.Werther/Folie1.JPG

Historiskt perspektiv GC-MS mitten på 50-talet. Test av läkemedel, hormoner, föroreningar,… MALDI (1985), ES-MS (1988) m.fl. har gett möjlighet att studera stora biomolekyler. (Nobelpris 2002) Kan användas vid diagnos av t.ex Malaria och Cancer (äggstock-, prostata-, bröst-)

Jonisationsmetoder Jonisations metod Typisk molekyl Prov preparation Mass range Egenskaper EI Liten flyktig GC/vätske eller fast prob -1000 Da Hård ger struktur info CI - 1000 Da Mjuk ESI Peptid/protein LC/spruta - 200 000 Da Mjuk / multi-laddad FAB Kolhydrater Prov +Matrix - 6000 Da Hårdare än ESI MALDI - 500 000 Da mjuk