Polymerase Chain Reaction – PCR

Slides:



Advertisements
Liknande presentationer
Objektorienterad Analys och UML En animation i Powerpoint © Kenneth Norrgård Ingår i studieperioden ”Planering av datasystem” vid Vasa Yrkeshögskola.
Advertisements

DNA-replikationen Fördjupning Niklas Dahrén.
Nukleotiderna i DNA eller RNA strängarna hålls ihop av fosfodiesterbindningar Se även Cellbiologi fig 17.3.
D1S80 – exempel på genetisk markör för studier av människa
Animation över translationen
Från gen till protein Niklas Dahrén.
Studier av genexpression
Från genotyp till fenotyp
Nye analyseteknikker (DNA) för kontroll av mikroorganismer
Transkriptionen Niklas Dahrén.
Genexpression; RNA-syntes och Proteinsyntes
OLIKA TYPER AV GENOM Biomedicinska analytikerprogrammet, T3 Ht-11 Karolinska Institutet Annica Nordvall Bodell.
Cellkärnan och nukleinsyror
Genkloning samt vektorsystem
K-RAS Mutationsanalys Molekylärpatologi Gastrointestinala sjukdomar
Chapter 25: Reconstructing and Using Phylogenies
Molekylära metoder för kartläggning av genetisk diversitet - en översikt Oscar Diaz.
Unika egenskaper hos kol
Genetik - ärftlighetslära
Repetition inför NP Lektion 4
Genetik II
Polymerase Chain Reaction
Gardeborn.se 1.Kunskapen om livet Tro & Vetande 2. Strukturen på livet Klassificering & Fossil 3. Omgivningen för livet Universum & Jorden 4. Konstruktionen.
Byggnadsmekanik gk 2.1 SNITTKRAFTER
Proteiner Allt liv präglas av aktivitet: - näringsämnen bryts ner.
Biokemi MNXA10/12 Hans-Erik Åkerlund
CHAPTER 17 Molecular Biology and Medicine
Genetik Intro.
1. Överföring av gener mellan arter
Molekylär genetik Gener har 2 viktiga funktioner
Styrteknik: Grundläggande logiska funktioner D2:1
Styrteknik 7.5 hp distans: SFC Introduction PLC5A:1 Bilder SFC = Sequential Function Chart Language SFC är ett grafiskt programspråk som används.
Grunder i teckning.
Copyright, Mahmud Al Hakim, Hakimdata.se Agenda 6. Tabeller 7. Objekt 8. Utskrift Att läsa Litteratur: modul 3, sid
Nukleinsyror: DNA och RNA
Protein Mer än hälften av cellens byggnadsmaterial är proteiner.
DNA Deoxyribonukleinsyra RNA Ribonukleinsyra
Kap 10 Marknad för turism •
Genteknik Mendel började korsa ärtor på 1700-talet.
Genetik Intro.
Styrteknik 7.5 hp distans: SFC med GX IEC SFC_B:1
Kataboliska cellprocesser
Estrar, syraanhydrider, aminer, amider
Emmy Österberg Malin Strömqvist Alexandra Eklund Jenny Joensuu Sabine Löfgren Tara Marf Kanyarat Srichada Redovisning av projektlaborationen.
Vimmerby Magnus Klofsten Generella framgångsfaktorer i kluster.
Cellen i funktion kap 5.
Läran om livet Biologisk mångfald Kapitel 1 i Spektrum Biologi
Produktens olika delar
Dna – KOPIERING OCH CELLDELNING
Cellens organeller och funktion Minas Al-Baghdadi, Doktorand Institutionen för neurovetenskap Avdelningen för medicinsk.
Sveriges lantbruksuniversitet Biologisk markkartering - nya analysmetoder för en bättre växtföljd - Agrovästs: Markvårdsdag den 3 feb 2011.
Akademiskt skrivande - konsten att reflektera & omformulera Anette Wahlandt språkhandledare.
Projektlab Thomas Österberg Martin Hyvönen Kalle bunnfors Jonas Karlsson KB3civ.
Kloningsverktyg och kloning Dagens föreläsning: Definition kloning (repetition) Grundläggande begrepp (repetition) Kloningsverktyg vektorer enzymer Ett.
Detektion och kvantifiering av HTLV-1 och -2 med Droplet Digital PCR Lorraine Eriksson, Biomedicinsk analytiker, Doktorand Laboratoriemedicinska Kliniken,
Sdfsajfdksadjflaskdfjsfd. Det var en gång …
Unika egenskaper hos kol
Algoritmer och datastrukturer Föreläsning 8 Tidskomplexitet (Weiss kap
AREA DEL 1.
Kap 5 – Trigonometri och komplettering kurs 3c
Kap 5 – Trigonometri och komplettering kurs 3c
Funktioner och orienterande översikt av farmaceutiska tillämpningar
Auvesta Kund Validering
Excel En introduktion.
Rita en figur Problemlösningsstrategier 1.
Marknadsanalys en analys i fyra steg
Kärnan i våra celler DNA (deoxiribonukleinsyra). Cellen Alla organismer består av minst en cell. Två olika typer av celltyper (prokaryota & eukaryota)
Fig. 3 Single-molecule DNA-XPA dynamics.
Expression of HCK and FYN were increased in C104S INA-6 cells.
GEN Tentafrågor Skapad av Stefan Albrektsson Uppdaterad av Joakim Alm
Presentationens avskrift:

Polymerase Chain Reaction – PCR Dagens föreläsning: Repetition PCR - Primer design Analys av PCR qRT PCR Polymerase Chain Reaction – PCR Molecular cell biology 7th . Lodish et al. Kapitel 5

Användningsområden för PCR Kopiering av kända DNA fragment från ex. genomiskt DNA Isolering av gensekvenser från organismer och jämföra dem Genterapi

Vad behövs för att sätta upp en PCR reaktion? Templat Primers Nukleotider

Nukleotidens struktur

dATP vs. ATP

DNA Polymeras Buffert Värmekälla

Primerdesign Plats för att rita upp nukleotider och hur de binder till varandra.

Uppgift: Skriv sekvensen på PCR-primers; (hypotetiska 7 nt primers) som ska användas för att amplifiera ett 30 bp DNA fragment från ett dsDNA templat med nedan sekvens. Markera i sekvensen var dina förslag på primrar motsvarar. 5’ GAACCAACGATTACTAGGTAACACATAGATCTGCTACGCTAGCGTTGGACCCTAG 3’ 3’ CTTGGTTGCTAATGATCCATTGTGTATCTAGACGATGCGATCGCAACCTGGGATC 5’ dsDNA 5’ GAACCAACGATTACTAGGTAACACATAGATCTGCTACGCTAGCGTTGGACCCTAG 3’ 3’ CTTGGTTGCTAATGATCCATTGTGTATCTAGACGATGCGATCGCAACCTGGGATC 5’ Uppströmsprimer/5’ Nedströmsprimer/3’

PCR-reaktionens steg Hot start Denaturering Annealing Elongering

Cykler och amplifiering

http://www.youtube.com/watch?v=JRAA4C2OPwg Se figur 5-20 i Lodish

Analys av PCR Agaros EtBr/SYBR safe Stege/Markör Laddningsbuffert Figur 5-19, Lodish

Agarosgel

1µg (10µl) av GeneRuler DNA Ladder Mix innehåller: 120ng av 500 bp fragmentet 120ng av 1000bp fragmentet 32ng av 2000bp fragmentet 120 ng av 3000bp fragmentet.

Spektrofotometri Lambert-Beers lag A=e x l x c

qRT PCR Vidareutveckling av PCR tekniken Mäta mRNA nivåer, genuttryck Mäter PCR produkt efter varje cykel

qRT PCR Reverse transcriptase: SYBR green: House-keeping/referensgen:

http://media.medfarm.uu.se/play/video/2308?module=_sy-qpcr

Polymerase Chain Reaction – PCR Dagens föreläsning: Repetition PCR - Primer design Analys av PCR qRT PCR Polymerase Chain Reaction – PCR Molecular cell biology 7th . Lodish et al. s.191-194