Specialfärgningar Cecilia Ottosson

En presentation över ämnet: "Specialfärgningar Cecilia Ottosson"— Presentationens avskrift:

1 Specialfärgningar Cecilia Ottosson
Laboratoriemetodik, grundläggande vt14 Biomedicinska analytikerprogrammet, inr laboratoriemedicin

2 Litteratur Cellular pathology - kap 7, 8, 9 och 14 - repetition kap 6

3 Specialfärgningar - synligt i mikroskopet Komplement till H&E
- påvisa närvaro/frånvaro av en viss typ av molekyler - var på vävnaden är de lokaliserade? - färgningar/histokemiska färgningar Histokemi (vävnadskemi) - lokalisering av olika ämnen i cellerna - synligt i mikroskopet - olöslig produkt - känsliga metoder - detektion på plats

4 Kontroller - test av metoden Positiv kontroll Negativ kontroll
- bakgrund - så likt det som ska studeras - simultant med provet Negativ kontroll

5 Färgning av bindväv Kollagen och muskel -Trikromfärgning Retikelfibrer
regel: en mindre molekyl kommer att penetrera och färga in vävnaden, men när en större molekyl kan penetrera samma vävnad kommer den att ersätta den mindre molekylen Retikelfibrer - Silverimpregnering - Argyrofil reaktion

6 Masson trikrom Avparaffinering och rehydrering Järnhematoxylin
Ponceau-Syrefuchsinlösning Phosphomolybdic/ phosphotungstic syra 5. Anilinblå/Light green 6. Dehydrering och montering Kärnor svarta Muskel, röda blodkroppar röda Kollagen blå/grön

7 Van Gieson Avparaffinering och rehydrering Weigerts hematoxylin
Van Gieson (pikrinsyra och syrefuchsin) Dehydrering och montering Kärnor svarta Muskel, röda blodkroppar gula Kollagen röd

8 Gordon and Sweets Avparaffinering och rehydrering
Syrahaltig kaliumpermanganat Oxalsyra Järnalun Silverlösning Formaldehyd Guldklorid Natriumtiosulfat Dehydrering och montering Retikelfibrer svart

9 Färgning av kolhydrater
Påvisandet av polysackarider - ex glykogen

10 Färgning av kolhydrater
PAS (Periodic Acid Schiff) - perjodsyra – klyvning av kol-kol bindningen  aldehyder - Schiffs reagens

11 PAS Avparaffinering och rehydrering Perjodsyra Schiffs reagens
Harris hematoxylin Dehydrering och montering PAS-positiv material magenta Kärnor blålila

12 Färgning av kolhydrater
AB (Alcian Blue) - sura mukoplysackarider - katjon färg → binder till negativt laddade grupper - differentiering: pH 1 el pH 2,5 AB-PAS (PAS-AB) - differentiering mellan neutrala och sura mukopolysackarider - sura mukopolysackarider – AB- färgning - neutrala mukopolysackarider – PAS-färgning - AB före PAS PAS-Diastas - differentiering mellan glykogen och andra mukosubstanser - diastas (α-amylas) bryter ner glykogenet till glukos

13 AB Avparaffinering och rehydrering Alcian blå-lösning med önskat pH
Neutral rött Dehydrering och montering Sura muciner blåa Kärnor röda

14 AB-PAS Avparaffinering och rehydrering Alcian blå Perjodsyra
Schiffs reagens Harris hematoxylin Dehydrering och montering Sura muciner blåa Neutrala muciner röda Blandning lila Kärnor blålila

15 PAS-Diastas Avparaffinering och rehydrering
Ett snitt i diastaslösning, ett snitt i avjoniserat vatten Perjodsyra Schiffs reagens Harris hematoxylin Dehydrering och montering Glykogen magenta i det obehandlade snittet, saknas i det behandlade snittet Kärnor blålila

16 Färgning av fettceller
Fryssnittning Lysokrom-metod - hydrofoba färger – löslig i fettcellerna Neutrala lipider – flytande/halvfast form vid RT Kolesterol – kristalliserad vid RT  färgning vid smältpunkten (150° C) Fosfolipider – fosfatgrupp, görs mer hydrofila, ej med lysokrommetoder

17 Oil Red O Neutrala lipider Hydrofobisk färg Oil Red O
Harris Hematoxylin Montering med vattenbaserad monteringsmedel Fettceller röda Kärnor blålila

18 Sudan Black Kolesterol och fosfolipider basisk färg Bromlösning
Natrium metabisulfit 70 % Etanol Sudan Black Carmalum Montering med vattenbaserad monteringsmedel Neutrala lipider, fosfolipider och kolesterol blå-svarta Kärnor röda

19 Färgning av enzymer Fryssnitt/utstryk Enzymer - hydrolaser
- oxireduktaser Substrat  primär reaktionsprodukt (PRP) PRP + kemiskt ämne  slutlig reaktionsprodukt (SRP) SRP – olöslig (precipitat)

20 Färgning av enzymer - Gomoris sura fosfataser Hydrolaser – fosfataser
- Metallprecipitering - substrat: natrium -glycerolfosfat - PRP: natriumfosfat - SRP: natriumfosfat + bly eller kalcium visualisering med vätesulfid – svart fällning Oxireduktaser - peroxidaser - substrat: H2O2 - PRP: O2 - SRP: O2 + kromogen (ex DAB) färgomslag (brun om DAB)

21 Färgning av pigmenter Artefaktspigmenter Exogena pigmenter
Endogena pigmenter

22 Perls reaktion Hemosiderrin (järn) Avparaffinering och rehydrering
HCl/Kaliumferrocyanid Neutral Red Dehydrering och montering Hemosiderrin blå Kärnor röda

23 Masson-Fontana Melanin, argentaffina granula Argentaffin reaktion
Avparaffinering och rehydrering Silverlösning Natriumtiosulfat Neutral Red Dehydrering och montering Melanin svart Kärnor röda

24 Färgning av mikroorganismer
Formaldehydfixerad material Bakterier Svamp Virus Parasiter

25 Gramfärgning Bakterier Cellväggens tjocklek
Avparaffinering och rehydrering Kristallviolett Jodlösning Aceton Neutral Red Dehydrering och montering Grampositiva blåa Gramnegativa röda

26 Ziehl-Neelsen Syra-fasta organismer (tuberkulosbakterien)
Fettrik cellvägg Avparaffinering och rehydrering Karbolfuchsin HCl-alkohol Metylenblått Dehydrering och montering Syra-fasta organismer röda Bakgrund blå

27 Grocott Svamp Argentaffin reaktion Avparaffinering och rehydrering
Kromsyra Natriumbisulfit Metenamin silverlösning Guldklorid Natriumtiosulfat Light green Dehydrering och montering Svamp svart Bakgrund grön

28 S-Giemsa Helicobacter pylori Romanowsky
Avparaffinering och rehydrering S-Giemsa Dehydrering och montering Helicobacter pylori blåa

29 Färgning av Amyloid Onormal protein Många former - olika metoder
- jod/svavelsyra - metylviolett - Kongo rött

30 Kongo rött Avparaffinering och rehydrering Harris hematoxylin
Dehydrering och montering Amyloid rosa-rött i polarisationsmikroskop äppel grön Kärnor blålila