Presentation laddar. Vänta.

Presentation laddar. Vänta.

K-RAS Mutationsanalys Molekylärpatologi Gastrointestinala sjukdomar 30 November 2010 Jenny Thureson Leg Biomedicinsk analytiker.

Liknande presentationer


En presentation över ämnet: "K-RAS Mutationsanalys Molekylärpatologi Gastrointestinala sjukdomar 30 November 2010 Jenny Thureson Leg Biomedicinsk analytiker."— Presentationens avskrift:

1 K-RAS Mutationsanalys Molekylärpatologi Gastrointestinala sjukdomar 30 November 2010 Jenny Thureson Leg Biomedicinsk analytiker

2 Medicinsk diagnostik  Laboratoriemedicin  Klinisk radiologi  Klinisk fysiologi  Klinisk patologi  Klinisk kemi  Mikrobiologi

3 Upp- arbetningsrum Sättrum Mastermix- rum Upp- arbetningsrum Instrumentrum FrysKyl Pre- PCR DNA Post- PCR RNA FoU-lab Cell- odling Kyl/ Frys Förråd Sättrum

4 Bakgrund

5

6 Analys  Provpreparering  Extrahering av DNA (2 steg)  Realtids-PCR  Databearbetning/Resultat

7 Provpreparering  Beställning  Patolog märker ut tumörområde på kloss  Klossen snittas  Snitten läggs i eppendorfrör (3 x 10 µm)

8 Extrahering av DNA  Avparaffinering över natt  Extrahering DNA  Kolonnbaserad metod

9 Koncentrationsbestämning DNA  Nanodrop (ng/µL)

10 Realtids-PCR Beräkning av patient DNA koncentration till LightCycler 480 Real-Time PCR prov nr vatten (µL)45,944,728,947, Volym pat DNA (µL)4,15,321,12, tot volym (µL)50 DNA till PCR (ng /µL) Patient DNA konc (ng/ µL)

11 Realtids-PCR  Mastermixberedning Antal prov: (x + 2 *1,1) (x = antal patientprover + Mixad Standard + NTC)6 Analys Huvudmixar Reaktions mix (µL)x1 Taq (µL)x1 Tot volym Reaktions mix Tot volym Taq K-RAS19,80,2130,71,32

12 Realtids-PCR  Sättningsrum  Sättningsschema  Mastermix + kontroll + prov + NTC  Sättning platta  Optisk film  Centrifugering

13 Realtids-PCR  LightCycler 480  Ca 1 h 50 min

14 Databearbetning/Resultat

15  Ex Gly12Asp  Mjukvara  12 Asp (GGT>GAT)  12 Ala (GGT>GCT)  12 Arg (GGT>CGT)  12 Cys (GGT>TGT)  12 Ser (GGT>AGT)  12 Val (GGT>GTT)  13 Asp (GGC>GAC)

16 Databearbetning/Resultat

17 Tack för mig!


Ladda ner ppt "K-RAS Mutationsanalys Molekylärpatologi Gastrointestinala sjukdomar 30 November 2010 Jenny Thureson Leg Biomedicinsk analytiker."

Liknande presentationer


Google-annonser